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當前位置:首頁產品中心實驗試劑試劑盒JYM0083Hu人白細胞介素1β(IL-1β)ELISA Kit

人白細胞介素1β(IL-1β)ELISA Kit

產品簡介

人白細胞介素1β(IL-1β)ELISA Kit,產品編碼:JYM0083Hu
Human Interleukin 1β(IL-1β)ELISA Kit
有效期:6個月
保存條件:2-8℃

更新時間:2024-03-19
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品牌基因美供貨周期現貨
應用領域醫療衛生,化工,生物產業,制藥/生物制藥,綜合

人白細胞介素1β(IL-1β)ELISA Kit,產品編碼:JYM0083Hu

人白細胞介素1β(IL-1β)ELISA Kit,Human Interleukin 1β(IL-1β)ELISA Kit

產品描述:

【實驗方法】雙抗體夾心法

【種屬】人

【檢測范圍】 見說明書

【檢測波長】450 nm

【樣本類型】血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本 

【反應時間】 1.5~2h


人白細胞介素1β(IL-1β)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供科研使用。

本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中白細胞介素1β(IL-1β)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素1β(IL-1β)水平。用純化的人白細胞介素1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素1β(IL-1β),再與HRP標記的白細胞介素1β(IL-1β)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成很終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素1β(IL-1β)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素1β(IL-1β)濃度。

試劑盒組成

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樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 

2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 

3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. 

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在第一、第二孔中分別加標準品 100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 180 pg/ml,120 pg/ml, 60pg/ml, 30 pg/ml)

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2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品很終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

 3. 加酶:每孔加入酶標試劑 50ul,空白孔除外。

 4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

 5. 配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。

 6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。

 7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50ul,再加入顯色劑 B50ul,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘。

8. 終止:每孔加終止液 50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

 9. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

注意事項

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

 2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

 3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間很好控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

 4. 請每次測定的同時做標準曲線,很好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請很后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

6. 底物請避光保存。 

7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 

9. 本試劑不同批號組分不得混用。 

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

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試劑盒性能

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.92 以上。

2.批內與批間應分別小于 9%和 15%.

檢測范圍

3.5pg/ml -200pg/ml


上海寶葉生物科技有限公司

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